Поскольку большинство макромолекул представлены в клетках относительно незначительным числом копий, одна или две молекулы красителя, связанные с макромолекулой, могут оставаться незамеченными. Альтернативный подход к проблеме чувствительности состоит в использовании флуоресценции.
Флуоресцирующие красители поглощают свет одной длины волны и излучают свет другой длины волны, более длинной. Если такое вещество облучить светом, длина волны которого совпадает с длиной волны света, поглощаемого красителем, и затем для анализа использовать фильтр, пропускающий свет с длиной волны, соответствующей свету, излучаемому красителем, флуоресцирующую молекулу можно выявить по свечению на темном поле. Высокая интенсивность излучаемого света является характерной особенностью таких молекул.
Применение флуоресцирующих красителей для окраски клеток предполагает использование специального флуоресцентного микроскопа. Такой микроскоп похож на обычный световой микроскоп, но здесь свет от осветителя, излучаемый мощным источником, проходит через два набора фильтров - один для задержания света перед образцом и другой для фильтрации света, полученного от образца.
Флуоресцентная микроскопия часто используется для выявления специфических белков или других молекул, которые становятся флуоресцирующими после ковалентного связывания с флуоресцирующими красителями. Например, флуоресцирующие красители могут быть связаны с молекулами антител, что сразу же превращает их в высокоспецифические и удобные красящие реагенты, селективно связывающиеся со специфическими макромолекулами на поверхности живой либо внутри фиксированной клетки. Для этой цели обычно используют два красителя - флуоресцеин, который дает интенсивную желто-зеленую флуоресценцию после возбуждения светло-голубым светом, и родамин, обусловливающий темно-красную флуоресценцию после возбуждения желто-зеленым светом.
Статьи и публикации:
Типы спор у низших и высших грибов. Формирование сумки и базидии
Все грибы принадлежат к гетеротрофным организмам, то есть они не способны синтезировать органические соединения и питаются различными органическими веществами, имеющимися в природе.
Размножаются грибы вегетативным, бесполым и половым спо ...
Учение Павлова о типах ВНД. Общин типы ВНД. Пластичность ВНД.
Учет типов ВНД в индивидуальном обучении и воспитании
Среди вопросов физиологии ВНД человека особое значение для совершенствования учебно-воспитательного процесса и разработки естественнонаучных теорий воспитания и обучения имеет учение о типах ВНД. Это связано с тем, что именно типологическ ...
Самые первые организмы
Одноклеточные водоросли
Многоклеточные водоросли
Первые наземные растения - псилофиты и мхи
3 млрд лет назад 1,5 млрд лет 1 млрд лет 400 млн лет
Появление папоротникообразных 370 млн лет
Первые семена - появление голо - 350 млн лет с ...