Основная проблема выделения нуклеиновых кислот заключается в получении клеток и отделении нуклеиновых кислот от связанных с ними белков и других клеточных компонентов. Помимо очистки нуклеиновых кислот от нежелательных компонентов, следует обратить внимание на то, что сами нуклеиновые кислоты требуют исключительно осторожного обращения, так как они чрезвычайно чувствительны к действию нуклеаз и гидродинамических сил. Клетки гомогенизируют различными методами, а из гомогената отделяют нуклеиновые кислоты. Из гомогената нуклеиновые кислоты можно выделить двумя методами, заключающиеся в "высаливании" ДНК различными смесями органических растворителей. Нуклеиновые кислоты остаются в водной фазе, в то время как другие денатурированные макромолекулы собираются на границе между фазами. Эти методы не позволяют выделить неповрежденными большие молекулы ДНК. Образовавшуюся гетерогенную смесь нуклеиновых кислот подвергают разделению на фракции методами ультрацентрифугирования, гель-фильтрации на сефадексах, хроматографированием. Полученные фракции ДНК подвергают секвенированию, для чего их подвергают действию эндонуклеаз рестрикции.
Статьи и публикации:
Изменения экспрессии генов при гипотермии
Как известно, в клетках растений, насекомых, млекопитающих как тепловой, так и холодовой шок вызывает изменения в активности генов. При этом начинается синтез небольшого числа «белков теплового шока» и прекращается синтез всех остальных б ...
Возрастные особенности системы кровообращения. Саморегуляция
сердечнососудистой системы и ее особенности у детей Крайнего Севера. Резервные
возможности системы кровообращения
Возрастные особенности:
У новорожденного ребенка связь с материнским организмом прекращается и его собственная система кровообращения берет на себя все необходимые функции. У детей относительная масса сердца и общий просвет сосудов больш ...
Торможение условных рефлексов. Значение условного торможения
для обучения и воспитания
Торможение, в физиологии — активный нервный процесс, вызываемый возбуждением и проявляющийся в угнетении или предупреждении др. волны возбуждения. Обеспечивает (вместе с возбуждением) нормальную деятельность всех органов и организма в цел ...