Биология » Методи исследования клеток » Выделение и фракционирование ДНК

Выделение и фракционирование ДНК

Основная проблема выделения нуклеиновых кислот заключается в получении клеток и отделении нуклеиновых кислот от связанных с ними белков и других клеточных компонентов. Помимо очистки нуклеиновых кислот от нежелательных компонентов, следует обратить внимание на то, что сами нуклеиновые кислоты требуют исключительно осторожного обращения, так как они чрезвычайно чувствительны к действию нуклеаз и гидродинамических сил. Клетки гомогенизируют различными методами, а из гомогената отделяют нуклеиновые кислоты. Из гомогената нуклеиновые кислоты можно выделить двумя методами, заключающиеся в "высаливании" ДНК различными смесями органических растворителей. Нуклеиновые кислоты остаются в водной фазе, в то время как другие денатурированные макромолекулы собираются на границе между фазами. Эти методы не позволяют выделить неповрежденными большие молекулы ДНК. Образовавшуюся гетерогенную смесь нуклеиновых кислот подвергают разделению на фракции методами ультрацентрифугирования, гель-фильтрации на сефадексах, хроматографированием. Полученные фракции ДНК подвергают секвенированию, для чего их подвергают действию эндонуклеаз рестрикции.

Статьи и публикации:

Манипуляционная активность как основа высших познавательных способностей животных
"Способность изготавливать и использовать орудия в течение долгого времени рассматривалась как чисто человеческая, - пишет в своей работе "Шимпанзе в природе: поведение." (М., Мир, 1992. С.546-583) английская исследовательн ...

Регуляция секреции желудка: а) иннервация желудка, б) первая фаза желудочной секреции (сложнорефлекторная), в) вторая и третья фазы желудочной секреции (нейрогуморальная)
Секреция желудочных желез наступает под влиянием нервных и гуморальных раздражителей, возникающих при поступлении пищи в ЖКТ, а также при виде и запахе пищи. Иннервация желудка. Эфферентные нервы желудок получает от парасимпатического и ...

Нейрофизиологические механизмы сна и его возрастные особенности. Гигиена сна
Сон - физиологическое состояние, которое характеризуется потерей активных психических связей субъекта с окружающим его миром. Сон является жизненно необходимым для высших животных и человека. Длительное время считали, что сон представляет ...

Разделы