Биология » Методи исследования клеток » Выделение и фракционирование ДНК

Выделение и фракционирование ДНК

Основная проблема выделения нуклеиновых кислот заключается в получении клеток и отделении нуклеиновых кислот от связанных с ними белков и других клеточных компонентов. Помимо очистки нуклеиновых кислот от нежелательных компонентов, следует обратить внимание на то, что сами нуклеиновые кислоты требуют исключительно осторожного обращения, так как они чрезвычайно чувствительны к действию нуклеаз и гидродинамических сил. Клетки гомогенизируют различными методами, а из гомогената отделяют нуклеиновые кислоты. Из гомогената нуклеиновые кислоты можно выделить двумя методами, заключающиеся в "высаливании" ДНК различными смесями органических растворителей. Нуклеиновые кислоты остаются в водной фазе, в то время как другие денатурированные макромолекулы собираются на границе между фазами. Эти методы не позволяют выделить неповрежденными большие молекулы ДНК. Образовавшуюся гетерогенную смесь нуклеиновых кислот подвергают разделению на фракции методами ультрацентрифугирования, гель-фильтрации на сефадексах, хроматографированием. Полученные фракции ДНК подвергают секвенированию, для чего их подвергают действию эндонуклеаз рестрикции.

Статьи и публикации:

Внешнее строение
Костные рыбы (Osteichthyes) – класс водных позвоночных. Все особенности строения рыб обусловлены средой, в которой они обитают. Длительная адаптация к жизни в воде не оставила ни одной лишней детали, создающей помехи при движении. Размер ...

Морфологические признаки
Размеры окуня в водоемах края обычно не превышают 20-25 см, максимально до 52 см. Тело овальной формы, сжато с боков, несколько горбатое. В большинстве случаев масса окуня не превышает 800-1200г, хотя отмечены случаи поимки более крупных ...

Разнообразие стилей
Вегетативный, или экологический, стиль настольных мини-садов – наиболее популярное направление, имитирующее природную экосистему, то есть уголок тропического леса, пустыни или морского побережья. Неслучайно другое название таких композици ...

Разделы