Возможность проведения различных манипуляций с ДНК in vitro всецело зависит от наличия очищенных ферментов, которые специфическим образом разрезают, модифицируют и соединяют молекулы. В настоящее время отсутствуют чисто химические методы, с помощью которых можно было бы осуществлять перестройку молекул ДНК с такими селективностью и разнообразием, которые характерны для ферментативных реакций. В то же время даже с помощью довольно небольшого числа ферментов можно получать рекомбинантные молекулы ДНК. Большинство этих ферментов были открыты при обстоятельствах, не связанных с их использованием при манипулировании с молекулами ДНК. На самом деле каждый фермент играет важную роль катализатора в том или ином химическом процессе, протекающем в организме, из которого он выделен. Использование ферментов в качестве инструмента при манипулировании с ДНК зависит, в частности, от их доступности и стабильности, а особенно от их чистоты, и прежде всего от того, свободны ли они от примесей, влияющих на ферментативную активность. TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT
Разные экзонуклеазы расщепляют цепь предпочтительно либо с 5'-, либо с 3'-конца, но иногда они не проявляют такой специфичности. Эндонуклеазам свободные концы не требуются, поэтому данные ферменты могут гидролизовать кольцевые молекулы ДНК. Разрезание осуществляется по внутренним фосфодиэфирным связям, при этом образуются фрагменты разной длины. С помощью экзонуклеаз тоже могут образовываться короткие полинуклеотидные фрагменты, однако конечным продуктом во многих случаях являются нуклеозидмонофосфаты, поскольку экзонуклеазы осуществляют гидролиз, отщепляя последовательно один остаток за другим.
Наконец, нуклеазы отличаются одна от другой по тому, с какой стороны от межнуклеотидного фосфодиэфирного мостика осуществляется гидролиз. Одни ферменты делают разрез между фосфатом и 3'-гидроксильной группой с образованием 5'-фосфомоноэфирных продуктов, другие – между фосфатом и 5'-гидроксильной группой.
Статьи и публикации:
Поясните процессы в расплавах и растворах. Почему
при растворении обычно температура понижается? Каковы особенности растворения в
воде? Какую роль играют гидрофильные и гидрофобные процессы в живых
Рассмотрим процессы, происходящие в расплавах. Стоит говорить о двух типах зарождения магм, на разных уровнях Земли, в разных геодинамических условиях: первые – основные и ультраосновные базальтоидные, возникшие на ранних этапах развития ...
Защита полевых культур от вредителей и болезней. Меры борьбы с болезнями риса
Соблюдение правильного севооборота. Лучшими предшественниками риса являются многолетние бобовые травы, которые в значительной степени уменьшают количество возбудителей болезней риса, находящихся в почве.
Заготовка семян со здоровых участ ...
Солнечная система, происхождение и строение планет
Солнечная система состоит из 9 планет и звезды Солнца, а также спутников планет, астероидов и комет.
Планеты расположены по следующей схеме: Меркурий, Венера, Земля, Марс, Юпитер, Сатурн, Уран, Нептун, Плутон.
Исходя из современной теор ...