Киназы составляют большой класс ферментов, катализирующих фосфорилирование многих биохимических соединений – от небольших молекул до очень крупных макромолекул, включая полипептиды и полинуклеотиды.
Полинуклеотидкиназа, широко используемая в качестве реактива в экспериментах с рекомбинантными ДНК, была выделена и очищена из клеток E. coli, инфицированных бактериофагом Т4. Фермент кодируется геномом бактериофага. Донором фосфата служит АТР, а одним из продуктов реакции является ADP. В ходе реакции специфически фосфорилируются 5'-концевые гидроксильные группы молекул ДНК и РНК; 3'-концевые гидроксильные группы не фосфорилируются. Одной из важных сфер применения полинуклеотидкиназы является мечение 5'-конца полинуклеотидной цепи с помощью радиоактивного 32Р с использованием АТР, меченной по у-фосфату. Последовательное действие фосфатазы и полинуклеотидкиназы приводит к замещению немеченого 5'-концевого фосфомоноэфира на радиоактивный без каких-либо других изменений в цепи.
Статьи и публикации:
Ферменты
Возможность проведения различных манипуляций с ДНК in vitro всецело зависит от наличия очищенных ферментов, которые специфическим образом разрезают, модифицируют и соединяют молекулы. В настоящее время отсутствуют чисто химические методы, ...
Микроэмульсии как растворители для органического синтеза
Использование микроэмульсий в органическом синтезе оказалось чрезвычайно полезным, поскольку они способны солюбилизировать полярные и неполярные компоненты, а также пространственно разделять или концентрировать реагенты. Дальнейшее обсужд ...
Смесь двух неионных ПАВ
Рассмотрим конкуренцию двух НПАВ за центры адсорбции на поверхности. Конечно, более гидрофобное НПАВ должно доминировать в адсорбционном слое вследствие его более низкой растворимости в водной фазе. Выше уже обсуждалась одновременная адсо ...