В настоящее время для реконструкции используют методики, состоящие в солюбилизации смеси белка и фосфолипида детергентом и последующем удалении детергента. После его удаления белок и фосфолипид спонтанно формируют однослойные везикулы, вполне пригодные для энзимологических исследований. Обычно выбирают детергенты с высокой критической концентрацией мицеллообразования и малыми размерами мицелл, с тем, чтобы их можно было легко удалить диализом или гель-фильтрацией. Чаще всего используют холат натрия и октилглюкозид. В качестве примеров можно привести встраивание цитохром с-оксидазы и Na+/K+-ATPазы.
С помощью такой методики можно ввести в везикулы отличные от фосфолипидов вещества, например холестерол или убихинон. В ряде случаев возникает необходимость в достаточно быстром удалении детергента, особенно если белок нестабилен при его избытке. Тогда применяют гель-фильтрационную хроматографию, тоже позволяющую эффективно отделить белково-липидные везикулы от детергента (например, при реконструкции глицеро-3-фосфатацилтрансферазы и фосфатидилинозитолсинтазы)
Ещё более быстрым является метод разведения, когда белково-липидно-детергентную смесь разводят до концентрации детергента много меньшей, чем критическая концентрация мицеллообразования. При этом спонтанно образуются белково-фосфолипидные везикулы, которые можно отделить от детергента центрифугированием.
Обычно используемый для отчистки мембранных ферментов тритон Х-100 весьма неудобен при реконструкции, поскольку его трудно удалить из системы. Для удаления тритона применяют шарики из полистирола, и одна из проблем – потеря белка из-за его сорбции на поверхности шариков. В качестве примера белка, реконструируемого этим методом, можно привести натриевый канал.
И наконец, для реконструкции применяли метод, основанный на диспергировании смеси холестерол-фосфолипид-белок в диэтиловом эфире и последующем испарении обращённой фазы.
Статьи и публикации:
Классификация межклеточных контактов
1.Замыкающие межклеточные контакты.
а) простой или рыхлый контакт;
б) плотный замыкающий контакт.
2.Адгезионные межклеточные контакты.
а) точечные контакты;
б) адгезионные пояски;
в) адгезионные соединения между клеткой и внутриклет ...
Возрастные особенности системы пищеварения
Пищеварительный канал состоит из системы органов, которые производят механическую и химическую обработку пищи и ее всасывание. В нем различают следующие отделы:
а) ротовая полость;
б) глотка;
в) пищевод;
г) желудок;
д) тонкий кишечни ...
Черенкование и посадка. Черенкование
Экспериментальное изучение окоренения черенков проходило в течение двух лет.
Черенкование хвойных растений производилось 3 июня 2008 года, спиреи - 17 июня 2009 года. Всего было подготовлено по 20 черенков каждого вида хвойных растений, ...