Схема очистки фермента от балластных веществ сводится к освобождению его от нерастворимых веществ, сопутствующих растворимых веществ и других ферментов. Процессы получения очищенных препаратов из поверхностных и глубинных культур несколько различны. Из поверхностных культур труднее получить высокоочищенные препараты из-за большого количества балластных веществ. Из глубинных культур получить очищенные препараты несколько легче, но при этом приходится вести выделение из разбавленных растворов, если выделение ферментов проводится из жидкой части культуры. Выделение осложняется, если фермент внутриклеточный, и тогда необходимо разрушать клетки микроорганизмов.
Принципиальную схему выделения и очистки ферментов из глубинных и поверхностных культур микроорганизмов можно представить в виде следующей схемы.
Из схемы ясно, что экстракт из поверхностной культуры или фильтрат культуральной жидкости является исходным материалом для получения препаратов ферментов различной степени очистки. На первом этапе выделения отходом процесса является нерастворимая часть культуры – биошрот, содержащий нерастворимые включения среды и биомассу продуцента.
|
Таблица 1 | ||||||||||
|
Стадии очистки |
Объём, мл |
Общее количество белка, мг |
Глюкоамилаэная активность |
Амилолитическая активность |
Трансглюкоэидазиая активность* | |||||
|
общая, ед. |
удельная, ед./мг белка |
выход,% |
степень очистки |
общая, ел. |
выход,% | |||||
|
Исходная культуральная жидкость |
1 200 |
13 600 |
28 500 |
2,1 |
100,0 |
1,0 |
9 500 |
100 |
Глюкоза,изомальтоза, | |
|
Отделение биомассы, концентрирование, отделение |
560 |
11 100 |
25 600 |
2,3 |
90,0 |
1,1 |
8 500 |
89,00 |
То же | |
|
Осаждение ацетоном, растворение в воде |
350 |
2 040 |
19 800 |
9,7 |
69,5 |
4,6 |
1 050 |
11,30 |
» | |
|
Ультрафильтрация |
55 |
1 610 |
18 200 |
11,3 |
64,0 |
5,4 |
860 |
9,10 |
» | |
|
Хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе |
555 |
298 |
15 000 |
50,4 |
52,5 |
24,5 |
30,0 |
0,35 |
Нет | |
|
Ультрафильтрация |
16 |
250 |
13 450 |
54,0 |
47,2 |
25,7 |
27,5 |
0,29 |
» | |
|
Гельфильтрование через акрилекс П-100 |
100 |
140 |
11 400 |
76,5 |
40,35 |
36,5 |
22,8 |
0,24 |
» | |
|
Обессоливание, лиофилизация |
0,1** |
92 |
7 150 |
77,0 |
25,0 |
37,0 |
14,3 |
0,15 |
» | |
|
* ** |
Характеризуется хроматографически по наличию изосахаров. Выряжено в г. | |||||||||
Статьи и публикации:
Термография. Биофизические
аспекты тепловидения.
В человеческом организме вследствие экзотермических биохимических процессов в клетках и тканях, а также за счет высвобождения энергии, связанной с синтезом ДНК и РНК, вырабатывается большое количество тепла-50-100 ккал/грамм. Это тепло ра ...
Природа
Природа Самарской области, с одной стороны, типична для средней полосы России, с другой стороны, воистину уникальна. Особенность ее состоит в том, что на сравнительно небольшой территории можно найти элементы природных зон, характерных пр ...
За и против клонирования
Уже известно, что, по крайней мере, 8 исследовательских групп по всему миру работают над клонированием человека. На протяжении 2002 всё больше и больше стран "дают законодательское добро" на клонирование, в основном в терапевтич ...