Схема очистки фермента от балластных веществ сводится к освобождению его от нерастворимых веществ, сопутствующих растворимых веществ и других ферментов. Процессы получения очищенных препаратов из поверхностных и глубинных культур несколько различны. Из поверхностных культур труднее получить высокоочищенные препараты из-за большого количества балластных веществ. Из глубинных культур получить очищенные препараты несколько легче, но при этом приходится вести выделение из разбавленных растворов, если выделение ферментов проводится из жидкой части культуры. Выделение осложняется, если фермент внутриклеточный, и тогда необходимо разрушать клетки микроорганизмов.
Принципиальную схему выделения и очистки ферментов из глубинных и поверхностных культур микроорганизмов можно представить в виде следующей схемы.
Из схемы ясно, что экстракт из поверхностной культуры или фильтрат культуральной жидкости является исходным материалом для получения препаратов ферментов различной степени очистки. На первом этапе выделения отходом процесса является нерастворимая часть культуры – биошрот, содержащий нерастворимые включения среды и биомассу продуцента.
|
Таблица 1 | ||||||||||
|
Стадии очистки |
Объём, мл |
Общее количество белка, мг |
Глюкоамилаэная активность |
Амилолитическая активность |
Трансглюкоэидазиая активность* | |||||
|
общая, ед. |
удельная, ед./мг белка |
выход,% |
степень очистки |
общая, ел. |
выход,% | |||||
|
Исходная культуральная жидкость |
1 200 |
13 600 |
28 500 |
2,1 |
100,0 |
1,0 |
9 500 |
100 |
Глюкоза,изомальтоза, | |
|
Отделение биомассы, концентрирование, отделение |
560 |
11 100 |
25 600 |
2,3 |
90,0 |
1,1 |
8 500 |
89,00 |
То же | |
|
Осаждение ацетоном, растворение в воде |
350 |
2 040 |
19 800 |
9,7 |
69,5 |
4,6 |
1 050 |
11,30 |
» | |
|
Ультрафильтрация |
55 |
1 610 |
18 200 |
11,3 |
64,0 |
5,4 |
860 |
9,10 |
» | |
|
Хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе |
555 |
298 |
15 000 |
50,4 |
52,5 |
24,5 |
30,0 |
0,35 |
Нет | |
|
Ультрафильтрация |
16 |
250 |
13 450 |
54,0 |
47,2 |
25,7 |
27,5 |
0,29 |
» | |
|
Гельфильтрование через акрилекс П-100 |
100 |
140 |
11 400 |
76,5 |
40,35 |
36,5 |
22,8 |
0,24 |
» | |
|
Обессоливание, лиофилизация |
0,1** |
92 |
7 150 |
77,0 |
25,0 |
37,0 |
14,3 |
0,15 |
» | |
|
* ** |
Характеризуется хроматографически по наличию изосахаров. Выряжено в г. | |||||||||
Статьи и публикации:
Сравнительный анализ укоренения черенков спиреи
японской
10 сентября 2009 года было проведено повторное измерение длины черенков спиреи японской.
Степень их укоренения мы отслеживали по двум параметрам: по изменению длины одного из боковых (первого от верхушки) побегов и по изменению длины сам ...
Комбинированная кожа и уход за ней
Комбинированная кожа (смешанный тип) встречается наиболее часто. У многих женщин сухость кожи наблюдается у глаз, на висках и на щеках, в то время как нос, лоб и подбородок покрыты обильной жировой смазкой. Такая картина характерна для ко ...
Основные определения
Регуляцией метаболизма называется управление скоростью биохимических процессов путем обратимого изменения количества белковых посредников, участвующих в этих процессах, или их активности.
Белковый посредник – более общий и точный термин, ...