Схема очистки фермента от балластных веществ сводится к освобождению его от нерастворимых веществ, сопутствующих растворимых веществ и других ферментов. Процессы получения очищенных препаратов из поверхностных и глубинных культур несколько различны. Из поверхностных культур труднее получить высокоочищенные препараты из-за большого количества балластных веществ. Из глубинных культур получить очищенные препараты несколько легче, но при этом приходится вести выделение из разбавленных растворов, если выделение ферментов проводится из жидкой части культуры. Выделение осложняется, если фермент внутриклеточный, и тогда необходимо разрушать клетки микроорганизмов.
Принципиальную схему выделения и очистки ферментов из глубинных и поверхностных культур микроорганизмов можно представить в виде следующей схемы.
Из схемы ясно, что экстракт из поверхностной культуры или фильтрат культуральной жидкости является исходным материалом для получения препаратов ферментов различной степени очистки. На первом этапе выделения отходом процесса является нерастворимая часть культуры – биошрот, содержащий нерастворимые включения среды и биомассу продуцента.
|
Таблица 1 | ||||||||||
|
Стадии очистки |
Объём, мл |
Общее количество белка, мг |
Глюкоамилаэная активность |
Амилолитическая активность |
Трансглюкоэидазиая активность* | |||||
|
общая, ед. |
удельная, ед./мг белка |
выход,% |
степень очистки |
общая, ел. |
выход,% | |||||
|
Исходная культуральная жидкость |
1 200 |
13 600 |
28 500 |
2,1 |
100,0 |
1,0 |
9 500 |
100 |
Глюкоза,изомальтоза, | |
|
Отделение биомассы, концентрирование, отделение |
560 |
11 100 |
25 600 |
2,3 |
90,0 |
1,1 |
8 500 |
89,00 |
То же | |
|
Осаждение ацетоном, растворение в воде |
350 |
2 040 |
19 800 |
9,7 |
69,5 |
4,6 |
1 050 |
11,30 |
» | |
|
Ультрафильтрация |
55 |
1 610 |
18 200 |
11,3 |
64,0 |
5,4 |
860 |
9,10 |
» | |
|
Хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе |
555 |
298 |
15 000 |
50,4 |
52,5 |
24,5 |
30,0 |
0,35 |
Нет | |
|
Ультрафильтрация |
16 |
250 |
13 450 |
54,0 |
47,2 |
25,7 |
27,5 |
0,29 |
» | |
|
Гельфильтрование через акрилекс П-100 |
100 |
140 |
11 400 |
76,5 |
40,35 |
36,5 |
22,8 |
0,24 |
» | |
|
Обессоливание, лиофилизация |
0,1** |
92 |
7 150 |
77,0 |
25,0 |
37,0 |
14,3 |
0,15 |
» | |
|
* ** |
Характеризуется хроматографически по наличию изосахаров. Выряжено в г. | |||||||||
Статьи и публикации:
Специфические для низкой температуры и
генных богатых глицином белков
Специфическая для низко температуры кДНК пшеницы pTACR7, представляет ген, определенный как tacr7 из озимой пшеницы. Термин низкотемпературно-специфический используется авторами, поскольку экспрессия гена tacr7 не вызывается обработкой эк ...
Способы переработки
грибов. Характерные преимущества и недостатки
Среди основных методов переработки грибов можно выделить маринование, соление, сушку, замораживание) и др.
Маринование грибов является довольно распространенным способом их консервирования. Основано маринование на консервирующем действии ...
Эволюционное учение Ч. Дарвина и его методологическое значение для
развития биологии
Теоретические построения Ч. Дарвина об эволюции видов опирались на анализ фактов изменчивости организмов в прирученном состоянии. С этого вопроса начинается «Происхождение видов», ему же посвящена специальная работа «Изменение животных и ...