Схема очистки фермента от балластных веществ сводится к освобождению его от нерастворимых веществ, сопутствующих растворимых веществ и других ферментов. Процессы получения очищенных препаратов из поверхностных и глубинных культур несколько различны. Из поверхностных культур труднее получить высокоочищенные препараты из-за большого количества балластных веществ. Из глубинных культур получить очищенные препараты несколько легче, но при этом приходится вести выделение из разбавленных растворов, если выделение ферментов проводится из жидкой части культуры. Выделение осложняется, если фермент внутриклеточный, и тогда необходимо разрушать клетки микроорганизмов.
Принципиальную схему выделения и очистки ферментов из глубинных и поверхностных культур микроорганизмов можно представить в виде следующей схемы.
Из схемы ясно, что экстракт из поверхностной культуры или фильтрат культуральной жидкости является исходным материалом для получения препаратов ферментов различной степени очистки. На первом этапе выделения отходом процесса является нерастворимая часть культуры – биошрот, содержащий нерастворимые включения среды и биомассу продуцента.
|
Таблица 1 | ||||||||||
|
Стадии очистки |
Объём, мл |
Общее количество белка, мг |
Глюкоамилаэная активность |
Амилолитическая активность |
Трансглюкоэидазиая активность* | |||||
|
общая, ед. |
удельная, ед./мг белка |
выход,% |
степень очистки |
общая, ел. |
выход,% | |||||
|
Исходная культуральная жидкость |
1 200 |
13 600 |
28 500 |
2,1 |
100,0 |
1,0 |
9 500 |
100 |
Глюкоза,изомальтоза, | |
|
Отделение биомассы, концентрирование, отделение |
560 |
11 100 |
25 600 |
2,3 |
90,0 |
1,1 |
8 500 |
89,00 |
То же | |
|
Осаждение ацетоном, растворение в воде |
350 |
2 040 |
19 800 |
9,7 |
69,5 |
4,6 |
1 050 |
11,30 |
» | |
|
Ультрафильтрация |
55 |
1 610 |
18 200 |
11,3 |
64,0 |
5,4 |
860 |
9,10 |
» | |
|
Хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе |
555 |
298 |
15 000 |
50,4 |
52,5 |
24,5 |
30,0 |
0,35 |
Нет | |
|
Ультрафильтрация |
16 |
250 |
13 450 |
54,0 |
47,2 |
25,7 |
27,5 |
0,29 |
» | |
|
Гельфильтрование через акрилекс П-100 |
100 |
140 |
11 400 |
76,5 |
40,35 |
36,5 |
22,8 |
0,24 |
» | |
|
Обессоливание, лиофилизация |
0,1** |
92 |
7 150 |
77,0 |
25,0 |
37,0 |
14,3 |
0,15 |
» | |
|
* ** |
Характеризуется хроматографически по наличию изосахаров. Выряжено в г. | |||||||||
Статьи и публикации:
Микроскопические исследования как метод познания клетки
Диаметр типичной клетки животных составляет 10-20 мкм, что в пять раз меньше мельчайшей видимой частицы. Только с появлением совершенных световых микроскопов в начале XIX века удалось установить тот факт, что все ткани животных и растений ...
Внешнее строение
Костные рыбы (Osteichthyes) – класс водных позвоночных. Все особенности строения рыб обусловлены средой, в которой они обитают. Длительная адаптация к жизни в воде не оставила ни одной лишней детали, создающей помехи при движении.
Размер ...
Характеристика пиявки
Пиявки (Hirudinei) - отряд класса кольчатых червей. Тело удлиненное или овальное, более или менее сплющенное в спинно-брюшном направлении, ясно разделенное на мелкие кольца, которые в числе 3 - 5 соответствуют одному сегменту тела; в коже ...