Пожалуй, наиболее объективным критерием чистоты выделенной мембранной фракции является присутствие в ней какого-либо уникального компонента, который содержится только в этой мембране или является в ней преобладающим. Обычно такими компонентами служат ферменты, которые в данном случае называют маркерами. Список маркерных ферментов, которые используются для контроля чистоты мембранных фракций, приведен в табл.1.2 При определении активности фермента следует принимать во внимание, что он может находиться в латентной форме, например благодаря тому, что локализуется на внутренней поверхности выделяемых мембранных везикул. Другие проблемы, связанные с оценкой чистоты выделенных мембран, рассмотрены в обзоре. Следует отметить, что рекомендуемые методы в большинстве случаев достаточно хорошо отработаны и стандартизованы. TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT
В ряде случаев более удобными мембранными маркерами являются не ферменты, а специфические рецепторы лектинов, гормонов, токсинов или антител. Если изучаемые системы хорошо охарактеризованы, то о чистоте мембранной фракции можно судить по ее белковому составу, определяемому с помощью электрофореза в полиак-риламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия. Например, наружная мембрана грамотрицательных бактерий имеет характерный набор полипептидов, которых нет в цитоплазматической мембране.
Таблица 1.2 Маркеры, используемые для контроля чистоты мембранных фракций, выделяемых из клеток млекопитающих "
Мембранная фракция |
Маркерный фермент |
Плазматические мембраны |
5 '-Нуклеотидаза |
Щелочная фосфодиэстераза | |
Na */К+-АТРаза (базолатераль- | |
ная мембрана эпителиальных | |
клеток) | |
Аденилатциклаза (базальная | |
мембрана гепатоцитов) | |
Аминопептидаза (мембрана | |
щеточной каемки эпителия) | |
Митохондрии (внутренняя |
Цитохром с-оксидаза |
мембрана) |
Сукцинат-цитохром с-оксидо- |
редуктаза | |
Митохондрии (наружная |
Моноаминооксидаза |
мембрана) | |
Лизосомы |
Кислая фосфатаза |
0-Галактозндаза | |
Пероксисомы |
Каталаза |
Уратоксидаза | |
Оксидаза D-аминокислот | |
Мембраны аппрата |
Галактозилтрансфераза |
Гольджи | |
Эндоплазматический |
Глюкозо-6-фосфатаза |
ретикулум |
Холинфосфотрансфераза |
NADPH-цитохром с-оксидо- | |
редуктаза | |
Цитозоль |
Лактатдегидрогеназа |
Статьи и публикации:
Формирование внутренних
оболочек Земли в процессе ее геологической эволюции. Основные этапы эволюции
Земли
История Земли по современным представлениям насчитывает примерно 4,6 млрд. лет. Многочисленные результаты исследования земной коры (химический состав и структура горных пород, их распределение по глубине, содержание радиоактивных изотопов ...
Классификация папоротников Пензенской области. Подкласс
Ophioglossidae - Офиоглоссиды
Семейство Ophioglossaceae – УЖОВНИКОВЫЕ(2/3)
Род Ophioglossum L. – Ужовник
O. vulgatum L. – У. Обыкновенный
Род Botrychium Sw. – Гроздовник
B. lunaria(L). Sw – Г. Полулунный
B. multifidum (S. G. Gmel.) Rupr. – Г. Многораздельный
II. ...
Выделение ферментов
На основе культуральной жидкости, содержащей внеклеточные протеиназы, можно получить ферментные препараты различной степени очистки, используя разнообразные методы (см. рис. 1) – начиная от высушивания распылением готовой культуральной жи ...