Пожалуй, наиболее объективным критерием чистоты выделенной мембранной фракции является присутствие в ней какого-либо уникального компонента, который содержится только в этой мембране или является в ней преобладающим. Обычно такими компонентами служат ферменты, которые в данном случае называют маркерами. Список маркерных ферментов, которые используются для контроля чистоты мембранных фракций, приведен в табл.1.2 При определении активности фермента следует принимать во внимание, что он может находиться в латентной форме, например благодаря тому, что локализуется на внутренней поверхности выделяемых мембранных везикул. Другие проблемы, связанные с оценкой чистоты выделенных мембран, рассмотрены в обзоре. Следует отметить, что рекомендуемые методы в большинстве случаев достаточно хорошо отработаны и стандартизованы.
В ряде случаев более удобными мембранными маркерами являются не ферменты, а специфические рецепторы лектинов, гормонов, токсинов или антител. Если изучаемые системы хорошо охарактеризованы, то о чистоте мембранной фракции можно судить по ее белковому составу, определяемому с помощью электрофореза в полиак-риламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия. Например, наружная мембрана грамотрицательных бактерий имеет характерный набор полипептидов, которых нет в цитоплазматической мембране.
Таблица 1.2 Маркеры, используемые для контроля чистоты мембранных фракций, выделяемых из клеток млекопитающих "
|
Мембранная фракция |
Маркерный фермент |
|
Плазматические мембраны |
5 '-Нуклеотидаза |
|
Щелочная фосфодиэстераза | |
|
Na */К+-АТРаза (базолатераль- | |
|
ная мембрана эпителиальных | |
|
клеток) | |
|
Аденилатциклаза (базальная | |
|
мембрана гепатоцитов) | |
|
Аминопептидаза (мембрана | |
|
щеточной каемки эпителия) | |
|
Митохондрии (внутренняя |
Цитохром с-оксидаза |
|
мембрана) |
Сукцинат-цитохром с-оксидо- |
|
редуктаза | |
|
Митохондрии (наружная |
Моноаминооксидаза |
|
мембрана) | |
|
Лизосомы |
Кислая фосфатаза |
|
0-Галактозндаза | |
|
Пероксисомы |
Каталаза |
|
Уратоксидаза | |
|
Оксидаза D-аминокислот | |
|
Мембраны аппрата |
Галактозилтрансфераза |
|
Гольджи | |
|
Эндоплазматический |
Глюкозо-6-фосфатаза |
|
ретикулум |
Холинфосфотрансфераза |
|
NADPH-цитохром с-оксидо- | |
|
редуктаза | |
|
Цитозоль |
Лактатдегидрогеназа |
Статьи и публикации:
Диетические и лечебные свойства кисломолочных продуктов
В нашей стране кисломолочные продукты особенно широко стали применять с начала XX в., когда И. И. Мечников впервые изучил значение их в питании человека. Он установил, что молочнокислые бактерии, попадая в кишечник вместе с кисломолочными ...
Солнечная система, происхождение и строение планет
Солнечная система состоит из 9 планет и звезды Солнца, а также спутников планет, астероидов и комет.
Планеты расположены по следующей схеме: Меркурий, Венера, Земля, Марс, Юпитер, Сатурн, Уран, Нептун, Плутон.
Исходя из современной теор ...
Революционная идея
Научные основы абиогенеза, или происхождение живого из неживого, заложил русский биохимик А.И. Опарин. В 1924 году, будучи 30-летним ученым, Опарин опубликовал статью «Происхождение жизни», которая, по мнению его коллег, «содержала семена ...