Пожалуй, наиболее объективным критерием чистоты выделенной мембранной фракции является присутствие в ней какого-либо уникального компонента, который содержится только в этой мембране или является в ней преобладающим. Обычно такими компонентами служат ферменты, которые в данном случае называют маркерами. Список маркерных ферментов, которые используются для контроля чистоты мембранных фракций, приведен в табл.1.2 При определении активности фермента следует принимать во внимание, что он может находиться в латентной форме, например благодаря тому, что локализуется на внутренней поверхности выделяемых мембранных везикул. Другие проблемы, связанные с оценкой чистоты выделенных мембран, рассмотрены в обзоре. Следует отметить, что рекомендуемые методы в большинстве случаев достаточно хорошо отработаны и стандартизованы. TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT
В ряде случаев более удобными мембранными маркерами являются не ферменты, а специфические рецепторы лектинов, гормонов, токсинов или антител. Если изучаемые системы хорошо охарактеризованы, то о чистоте мембранной фракции можно судить по ее белковому составу, определяемому с помощью электрофореза в полиак-риламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия. Например, наружная мембрана грамотрицательных бактерий имеет характерный набор полипептидов, которых нет в цитоплазматической мембране.
Таблица 1.2 Маркеры, используемые для контроля чистоты мембранных фракций, выделяемых из клеток млекопитающих "
|
Мембранная фракция |
Маркерный фермент |
|
Плазматические мембраны |
5 '-Нуклеотидаза |
|
Щелочная фосфодиэстераза | |
|
Na */К+-АТРаза (базолатераль- | |
|
ная мембрана эпителиальных | |
|
клеток) | |
|
Аденилатциклаза (базальная | |
|
мембрана гепатоцитов) | |
|
Аминопептидаза (мембрана | |
|
щеточной каемки эпителия) | |
|
Митохондрии (внутренняя |
Цитохром с-оксидаза |
|
мембрана) |
Сукцинат-цитохром с-оксидо- |
|
редуктаза | |
|
Митохондрии (наружная |
Моноаминооксидаза |
|
мембрана) | |
|
Лизосомы |
Кислая фосфатаза |
|
0-Галактозндаза | |
|
Пероксисомы |
Каталаза |
|
Уратоксидаза | |
|
Оксидаза D-аминокислот | |
|
Мембраны аппрата |
Галактозилтрансфераза |
|
Гольджи | |
|
Эндоплазматический |
Глюкозо-6-фосфатаза |
|
ретикулум |
Холинфосфотрансфераза |
|
NADPH-цитохром с-оксидо- | |
|
редуктаза | |
|
Цитозоль |
Лактатдегидрогеназа |
Статьи и публикации:
Память. Теория памяти. Возрастные особенности памяти.
Тренировка памяти
Память – это отражение непосредственного и прошлого опыта человека путем запоминания, сохранения и последующего воспроизведения ранее пережитых им чувств, мыслей и образов прежде воспринятых предметов и явлений.
В основе памяти лежат асс ...
Происхождение Земли и других планет солнечной системы. Происхождение
Земли
Особое место в Солнечной системе занимает Земля – единственная планета, на которой в течение миллиардов лет развиваются различные формы жизни. Известно несколько гипотез о происхождении земли. Почти все они сводятся к тому, что исходным в ...
Физиологические данные
Радиусы, которые были затабулированы Ноордеграафом при конструировании исходной модели, относились к субъекту роста 175 см и веса 75 кг. Большинство этих радиусов согласуются с данными, опубликованными позднее. Исключение представляют рад ...