Пожалуй, наиболее объективным критерием чистоты выделенной мембранной фракции является присутствие в ней какого-либо уникального компонента, который содержится только в этой мембране или является в ней преобладающим. Обычно такими компонентами служат ферменты, которые в данном случае называют маркерами. Список маркерных ферментов, которые используются для контроля чистоты мембранных фракций, приведен в табл.1.2 При определении активности фермента следует принимать во внимание, что он может находиться в латентной форме, например благодаря тому, что локализуется на внутренней поверхности выделяемых мембранных везикул. Другие проблемы, связанные с оценкой чистоты выделенных мембран, рассмотрены в обзоре. Следует отметить, что рекомендуемые методы в большинстве случаев достаточно хорошо отработаны и стандартизованы.
В ряде случаев более удобными мембранными маркерами являются не ферменты, а специфические рецепторы лектинов, гормонов, токсинов или антител. Если изучаемые системы хорошо охарактеризованы, то о чистоте мембранной фракции можно судить по ее белковому составу, определяемому с помощью электрофореза в полиак-риламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия. Например, наружная мембрана грамотрицательных бактерий имеет характерный набор полипептидов, которых нет в цитоплазматической мембране.
Таблица 1.2 Маркеры, используемые для контроля чистоты мембранных фракций, выделяемых из клеток млекопитающих "
|
Мембранная фракция |
Маркерный фермент |
|
Плазматические мембраны |
5 '-Нуклеотидаза |
|
Щелочная фосфодиэстераза | |
|
Na */К+-АТРаза (базолатераль- | |
|
ная мембрана эпителиальных | |
|
клеток) | |
|
Аденилатциклаза (базальная | |
|
мембрана гепатоцитов) | |
|
Аминопептидаза (мембрана | |
|
щеточной каемки эпителия) | |
|
Митохондрии (внутренняя |
Цитохром с-оксидаза |
|
мембрана) |
Сукцинат-цитохром с-оксидо- |
|
редуктаза | |
|
Митохондрии (наружная |
Моноаминооксидаза |
|
мембрана) | |
|
Лизосомы |
Кислая фосфатаза |
|
0-Галактозндаза | |
|
Пероксисомы |
Каталаза |
|
Уратоксидаза | |
|
Оксидаза D-аминокислот | |
|
Мембраны аппрата |
Галактозилтрансфераза |
|
Гольджи | |
|
Эндоплазматический |
Глюкозо-6-фосфатаза |
|
ретикулум |
Холинфосфотрансфераза |
|
NADPH-цитохром с-оксидо- | |
|
редуктаза | |
|
Цитозоль |
Лактатдегидрогеназа |
Статьи и публикации:
Укоренение черенков сорта 'Little Princess'
Черенки спиреи японской сорта 'Little Princess' лучше укоренились под действием "Экосила": длина черенков увеличилась на 1-4 см, а прирост побегов составил от 3 до 6 см.
Хуже прижились черенки контрольной группы (прирост черенк ...
Функции науки
Анализ деятельности института науки в современном обществе дает основание утверждать, что главной функцией науки является производство и умножение достоверного знания, позволяющего раскрывать и объяснять закономерности окружающего мира. Н ...
Понятие биосферы
Понятие «биосфера», по мнению В.И. Вернадского, было сформулировано (без употребления самого термина) Ж.Б. Ламарком в начале XIX в. А. Гумбольдт выделял сферу жизни как неотъемлемую часть географической оболочки. Наконец, Э. Зюсс в 1875 г ...