Пожалуй, наиболее объективным критерием чистоты выделенной мембранной фракции является присутствие в ней какого-либо уникального компонента, который содержится только в этой мембране или является в ней преобладающим. Обычно такими компонентами служат ферменты, которые в данном случае называют маркерами. Список маркерных ферментов, которые используются для контроля чистоты мембранных фракций, приведен в табл.1.2 При определении активности фермента следует принимать во внимание, что он может находиться в латентной форме, например благодаря тому, что локализуется на внутренней поверхности выделяемых мембранных везикул. Другие проблемы, связанные с оценкой чистоты выделенных мембран, рассмотрены в обзоре. Следует отметить, что рекомендуемые методы в большинстве случаев достаточно хорошо отработаны и стандартизованы.
В ряде случаев более удобными мембранными маркерами являются не ферменты, а специфические рецепторы лектинов, гормонов, токсинов или антител. Если изучаемые системы хорошо охарактеризованы, то о чистоте мембранной фракции можно судить по ее белковому составу, определяемому с помощью электрофореза в полиак-риламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия. Например, наружная мембрана грамотрицательных бактерий имеет характерный набор полипептидов, которых нет в цитоплазматической мембране.
Таблица 1.2 Маркеры, используемые для контроля чистоты мембранных фракций, выделяемых из клеток млекопитающих "
Мембранная фракция |
Маркерный фермент |
Плазматические мембраны |
5 '-Нуклеотидаза |
Щелочная фосфодиэстераза | |
Na */К+-АТРаза (базолатераль- | |
ная мембрана эпителиальных | |
клеток) | |
Аденилатциклаза (базальная | |
мембрана гепатоцитов) | |
Аминопептидаза (мембрана | |
щеточной каемки эпителия) | |
Митохондрии (внутренняя |
Цитохром с-оксидаза |
мембрана) |
Сукцинат-цитохром с-оксидо- |
редуктаза | |
Митохондрии (наружная |
Моноаминооксидаза |
мембрана) | |
Лизосомы |
Кислая фосфатаза |
0-Галактозндаза | |
Пероксисомы |
Каталаза |
Уратоксидаза | |
Оксидаза D-аминокислот | |
Мембраны аппрата |
Галактозилтрансфераза |
Гольджи | |
Эндоплазматический |
Глюкозо-6-фосфатаза |
ретикулум |
Холинфосфотрансфераза |
NADPH-цитохром с-оксидо- | |
редуктаза | |
Цитозоль |
Лактатдегидрогеназа |
Статьи и публикации:
Асимметрия мозга и специальные способности
Наличие двух сигнальных систем в психике человека связано с деятельностью правого и левого полушарий мозга, первое из которых более ответственно за продуцирование образов и эмоций, а второе - слов и речи в целом. Относительное преобладани ...
Регуляция обмена веществ и энергии
В регуляции обмена веществ и энергии выделяют регуляцию обмена организма веществами и энергией с окружающей средой и регуляцию метаболизма в самом организме.
Конечной целью регуляции обмена веществ и энергии является удовлетворение в соо ...
Строение и секреторная функция тонкого кишечника, особенности его
регуляции. Понятие о пристеночном и полостном пищеварении
В тонкой кишке происходят наиболее существенные процессы расщепления пищевых веществ и всасывание продуктов расщепления в кровь и лимфу. Химические превращения пищи в тонкой кишке происходят под влиянием ферментов, содержащихся в поджелуд ...