Пожалуй, наиболее объективным критерием чистоты выделенной мембранной фракции является присутствие в ней какого-либо уникального компонента, который содержится только в этой мембране или является в ней преобладающим. Обычно такими компонентами служат ферменты, которые в данном случае называют маркерами. Список маркерных ферментов, которые используются для контроля чистоты мембранных фракций, приведен в табл.1.2 При определении активности фермента следует принимать во внимание, что он может находиться в латентной форме, например благодаря тому, что локализуется на внутренней поверхности выделяемых мембранных везикул. Другие проблемы, связанные с оценкой чистоты выделенных мембран, рассмотрены в обзоре. Следует отметить, что рекомендуемые методы в большинстве случаев достаточно хорошо отработаны и стандартизованы.
В ряде случаев более удобными мембранными маркерами являются не ферменты, а специфические рецепторы лектинов, гормонов, токсинов или антител. Если изучаемые системы хорошо охарактеризованы, то о чистоте мембранной фракции можно судить по ее белковому составу, определяемому с помощью электрофореза в полиак-риламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия. Например, наружная мембрана грамотрицательных бактерий имеет характерный набор полипептидов, которых нет в цитоплазматической мембране.
Таблица 1.2 Маркеры, используемые для контроля чистоты мембранных фракций, выделяемых из клеток млекопитающих "
|
Мембранная фракция |
Маркерный фермент |
|
Плазматические мембраны |
5 '-Нуклеотидаза |
|
Щелочная фосфодиэстераза | |
|
Na */К+-АТРаза (базолатераль- | |
|
ная мембрана эпителиальных | |
|
клеток) | |
|
Аденилатциклаза (базальная | |
|
мембрана гепатоцитов) | |
|
Аминопептидаза (мембрана | |
|
щеточной каемки эпителия) | |
|
Митохондрии (внутренняя |
Цитохром с-оксидаза |
|
мембрана) |
Сукцинат-цитохром с-оксидо- |
|
редуктаза | |
|
Митохондрии (наружная |
Моноаминооксидаза |
|
мембрана) | |
|
Лизосомы |
Кислая фосфатаза |
|
0-Галактозндаза | |
|
Пероксисомы |
Каталаза |
|
Уратоксидаза | |
|
Оксидаза D-аминокислот | |
|
Мембраны аппрата |
Галактозилтрансфераза |
|
Гольджи | |
|
Эндоплазматический |
Глюкозо-6-фосфатаза |
|
ретикулум |
Холинфосфотрансфераза |
|
NADPH-цитохром с-оксидо- | |
|
редуктаза | |
|
Цитозоль |
Лактатдегидрогеназа |
Статьи и публикации:
Общие аналитические признаки фитоценоза: встречаемость, жизненность (виталитет),
фенофаза, феноспектр, аспект. Методы их учета. Понятие о проективном покрытии,
ценокванте
Наиболее простым показателем пространственного распределения вида является его встречаемость
, метод изучения которой разработан К. Раункиером. Для оценки встречаемости вида в ценопопуляции регулярно или в случайном порядке закладывается ...
Основные положения нейронной теории
Вся нервная система построена из нервной ткани. Нервная ткань состоит из нейронов и нейроглии. Нейроглия обеспечивает существование и специфические функции нейронов, выполняет опорную, трофическую, разграничительную и защитную функции. По ...
Емкость в кабеле
Каково влияние постоянной времени на ток в кабеле? Как и в случае простой RC-цепочки (рис. 1С), нарастание и спад потенциала в ответ на скачкообразное изменение тока замедляется благодаря наличию конденсатора. Ситуация осложняется тем, чт ...