Выделение ферментов
Страница 1

На основе культуральной жидкости, содержащей внеклеточные протеиназы, можно получить ферментные препараты различной степени очистки, используя разнообразные методы (см. рис. 1) – начиная от высушивания распылением готовой культуральной жидкости и до методов получения высокоочищенных ферментных препаратов и кристаллических протеиназ.

В таблице 4 представлены основные этапы выделения высокоочищенной протеиназы из технического препарата Г3х. Эта схема позволяет получить с высоким выходом (до 22 %) очищенный препарат внеклеточной нейтральной протеиназы из В. subtilis, которая относится к металлопротеиназам.

Таблица 4

Стадия выделения

Характеристика стадии

Выход активной протеиназы, % от исходной

Протосубтапин Г3х

Исходный материал для выделении протеазы

100

Растворение

Растворение протосубтилина в воде с рН 7,8 до концентрации сухого вещества 10 %

92

Отделение нерастворимой части

Фильтрование

88

Концентрирование

Очистка ультрафильтрацией и концентрирование до содержания белка в концентрате 3,5 – 4,0 %

84

Освобождение от пигмента

Обесцвечивание на ДЭАЭ-целлюлозе

82

Фракционирование ферментного комплекса

Хроматография на КМ-целлюлозе

44

Концентрирование элюата, получаемого при хроматографии

Обессоливание и концентрирование методом ультрафильтрации

38

Получение сухого высокоочищенного препарата нейтральной протеиназы

Сублимационная сушка концентрата

22

Дальнейшие исследования протеолитических ферментов этого микроорганизма позволили установить в них четыре компонента, которые различались между собой по многим физико-химическим характеристикам (табл. 4), особенно по оптимуму рН. Из таблицы 6 видно, что протеиназа II обладает широким диапазоном действия в интервале рН от 7,5 до 11, протеиназа IV является сильнощелочной и т. д.

Таблица 6

Компонент протеиназ

Молекулярная масса

Изоэлектрическая точка, pI

Оптимальный рН

рК

Кин, с-1

I

44 000

8,4

7,0

5,3; 8,8

0,9·10-3

II

40 000

8,8

7,5 – 11

5,7; 9,3; 9,8; 12,2

4,0·10-5

III

23 000

9,5

6,5

5,3; 7,7

3,3·10-4

IV

29 000

10,1

11,0

8,5

2,0·10-4

Страницы: 1 2 3

Статьи и публикации:

Микроскопические исследования как метод познания клетки
Диаметр типичной клетки животных составляет 10-20 мкм, что в пять раз меньше мельчайшей видимой частицы. Только с появлением совершенных световых микроскопов в начале XIX века удалось установить тот факт, что все ткани животных и растений ...

Внутренние органы
Внутренние органы расположены внутри тела человека, преимущественно в его основных полостях – грудной и брюшной, хотя отдельные органы находятся в области головы, шеи и в полости таза. Основная функция внутренних органов – участие в обмен ...

Шизогония.
Шизогония стадия бесполого размножения в жизненном цикле спорозойных (простейших паразитов), обитающих в печени или эритроцитах. Также характерна для одноклеточных, простейших (радиолярий, некоторых водорослей) и для отдельных грибов. При ...

Разделы