Выделение ферментов
Страница 1

На основе культуральной жидкости, содержащей внеклеточные протеиназы, можно получить ферментные препараты различной степени очистки, используя разнообразные методы (см. рис. 1) – начиная от высушивания распылением готовой культуральной жидкости и до методов получения высокоочищенных ферментных препаратов и кристаллических протеиназ.

В таблице 4 представлены основные этапы выделения высокоочищенной протеиназы из технического препарата Г3х. Эта схема позволяет получить с высоким выходом (до 22 %) очищенный препарат внеклеточной нейтральной протеиназы из В. subtilis, которая относится к металлопротеиназам.

Таблица 4

Стадия выделения

Характеристика стадии

Выход активной протеиназы, % от исходной

Протосубтапин Г3х

Исходный материал для выделении протеазы

100

Растворение

Растворение протосубтилина в воде с рН 7,8 до концентрации сухого вещества 10 %

92

Отделение нерастворимой части

Фильтрование

88

Концентрирование

Очистка ультрафильтрацией и концентрирование до содержания белка в концентрате 3,5 – 4,0 %

84

Освобождение от пигмента

Обесцвечивание на ДЭАЭ-целлюлозе

82

Фракционирование ферментного комплекса

Хроматография на КМ-целлюлозе

44

Концентрирование элюата, получаемого при хроматографии

Обессоливание и концентрирование методом ультрафильтрации

38

Получение сухого высокоочищенного препарата нейтральной протеиназы

Сублимационная сушка концентрата

22

Дальнейшие исследования протеолитических ферментов этого микроорганизма позволили установить в них четыре компонента, которые различались между собой по многим физико-химическим характеристикам (табл. 4), особенно по оптимуму рН. Из таблицы 6 видно, что протеиназа II обладает широким диапазоном действия в интервале рН от 7,5 до 11, протеиназа IV является сильнощелочной и т. д.

Таблица 6

Компонент протеиназ

Молекулярная масса

Изоэлектрическая точка, pI

Оптимальный рН

рК

Кин, с-1

I

44 000

8,4

7,0

5,3; 8,8

0,9·10-3

II

40 000

8,8

7,5 – 11

5,7; 9,3; 9,8; 12,2

4,0·10-5

III

23 000

9,5

6,5

5,3; 7,7

3,3·10-4

IV

29 000

10,1

11,0

8,5

2,0·10-4

Страницы: 1 2 3

Статьи и публикации:

Атмосфера
Атмосфера представляет собой газовую оболочку, окружающую Землю и вращающуюся с ней как единое целое. Атмосфера состоит в основном из газов и различных примесей (пыль, капли воды, кристаллы льда, морские соли, продукты горения). Концентра ...

Клонирование ДНК
Многие рестрицирующие нуклеазы вносят разрывы в две цепи ДНК со смещением на несколько нуклеотидов, так что на концах образуются короткие одноцепочечные участки. Эти одноцепочечные концевые участки обладают способностью образовывать компл ...

Введение.
Кровь представляет собой жидкость (жидкая ткань мезодермального происхождения), красного цвета, слабо щелочной реакции, солоноватого вкуса с удельным весом 1,054-1,066. Совместно с тканевой жидкостью и лимфой она образует внутреннюю среду ...

Разделы