На основе культуральной жидкости, содержащей внеклеточные протеиназы, можно получить ферментные препараты различной степени очистки, используя разнообразные методы (см. рис. 1) – начиная от высушивания распылением готовой культуральной жидкости и до методов получения высокоочищенных ферментных препаратов и кристаллических протеиназ. Механические беговые дорожки Спортивный город Екатеринбург. TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT
В таблице 4 представлены основные этапы выделения высокоочищенной протеиназы из технического препарата Г3х. Эта схема позволяет получить с высоким выходом (до 22 %) очищенный препарат внеклеточной нейтральной протеиназы из В. subtilis, которая относится к металлопротеиназам.
|
Таблица 4 | ||
|
Стадия выделения |
Характеристика стадии |
Выход активной протеиназы, % от исходной |
|
Протосубтапин Г3х |
Исходный материал для выделении протеазы |
100 |
|
Растворение |
Растворение протосубтилина в воде с рН 7,8 до концентрации сухого вещества 10 % |
92 |
|
Отделение нерастворимой части |
Фильтрование |
88 |
|
Концентрирование |
Очистка ультрафильтрацией и концентрирование до содержания белка в концентрате 3,5 – 4,0 % |
84 |
|
Освобождение от пигмента |
Обесцвечивание на ДЭАЭ-целлюлозе |
82 |
|
Фракционирование ферментного комплекса |
Хроматография на КМ-целлюлозе |
44 |
|
Концентрирование элюата, получаемого при хроматографии |
Обессоливание и концентрирование методом ультрафильтрации |
38 |
|
Получение сухого высокоочищенного препарата нейтральной протеиназы |
Сублимационная сушка концентрата |
22 |
Дальнейшие исследования протеолитических ферментов этого микроорганизма позволили установить в них четыре компонента, которые различались между собой по многим физико-химическим характеристикам (табл. 4), особенно по оптимуму рН. Из таблицы 6 видно, что протеиназа II обладает широким диапазоном действия в интервале рН от 7,5 до 11, протеиназа IV является сильнощелочной и т. д.
|
Таблица 6 | |||||
|
Компонент протеиназ |
Молекулярная масса |
Изоэлектрическая точка, pI |
Оптимальный рН |
рК |
Кин, с-1 |
|
I |
44 000 |
8,4 |
7,0 |
5,3; 8,8 |
0,9·10-3 |
|
II |
40 000 |
8,8 |
7,5 – 11 |
5,7; 9,3; 9,8; 12,2 |
4,0·10-5 |
|
III |
23 000 |
9,5 |
6,5 |
5,3; 7,7 |
3,3·10-4 |
|
IV |
29 000 |
10,1 |
11,0 |
8,5 |
2,0·10-4 |
Статьи и публикации:
Клонирование ДНК
Многие рестрицирующие нуклеазы вносят разрывы в две цепи ДНК со смещением на несколько нуклеотидов, так что на концах образуются короткие одноцепочечные участки. Эти одноцепочечные концевые участки обладают способностью образовывать компл ...
Регуляция активности мембраносвязанных ферментов
Мембранные ферменты отличаются от растворимых ферментов одним важным свойством: все они прочно связаны с липидным бислоем соответствующих мембран. Поэтому помимо субстратов, активаторов или ингибиторов их регуляторами являются сами мембра ...
Организм как единое целое. Основные закономерности и факторы
роста и развития человеческого организма
Целостность организма, т. е. его объединение (интегрирование), обеспечивается:
1) структурным соединением всех частей организма (клеток, тканей, органов, жидкостей и др.);
2) связью всех частей организма: а) при помощи жидкостей, циркул ...