На основе культуральной жидкости, содержащей внеклеточные протеиназы, можно получить ферментные препараты различной степени очистки, используя разнообразные методы (см. рис. 1) – начиная от высушивания распылением готовой культуральной жидкости и до методов получения высокоочищенных ферментных препаратов и кристаллических протеиназ. Механические беговые дорожки Спортивный город Екатеринбург.
В таблице 4 представлены основные этапы выделения высокоочищенной протеиназы из технического препарата Г3х. Эта схема позволяет получить с высоким выходом (до 22 %) очищенный препарат внеклеточной нейтральной протеиназы из В. subtilis, которая относится к металлопротеиназам.
|
Таблица 4 | ||
|
Стадия выделения |
Характеристика стадии |
Выход активной протеиназы, % от исходной |
|
Протосубтапин Г3х |
Исходный материал для выделении протеазы |
100 |
|
Растворение |
Растворение протосубтилина в воде с рН 7,8 до концентрации сухого вещества 10 % |
92 |
|
Отделение нерастворимой части |
Фильтрование |
88 |
|
Концентрирование |
Очистка ультрафильтрацией и концентрирование до содержания белка в концентрате 3,5 – 4,0 % |
84 |
|
Освобождение от пигмента |
Обесцвечивание на ДЭАЭ-целлюлозе |
82 |
|
Фракционирование ферментного комплекса |
Хроматография на КМ-целлюлозе |
44 |
|
Концентрирование элюата, получаемого при хроматографии |
Обессоливание и концентрирование методом ультрафильтрации |
38 |
|
Получение сухого высокоочищенного препарата нейтральной протеиназы |
Сублимационная сушка концентрата |
22 |
Дальнейшие исследования протеолитических ферментов этого микроорганизма позволили установить в них четыре компонента, которые различались между собой по многим физико-химическим характеристикам (табл. 4), особенно по оптимуму рН. Из таблицы 6 видно, что протеиназа II обладает широким диапазоном действия в интервале рН от 7,5 до 11, протеиназа IV является сильнощелочной и т. д.
|
Таблица 6 | |||||
|
Компонент протеиназ |
Молекулярная масса |
Изоэлектрическая точка, pI |
Оптимальный рН |
рК |
Кин, с-1 |
|
I |
44 000 |
8,4 |
7,0 |
5,3; 8,8 |
0,9·10-3 |
|
II |
40 000 |
8,8 |
7,5 – 11 |
5,7; 9,3; 9,8; 12,2 |
4,0·10-5 |
|
III |
23 000 |
9,5 |
6,5 |
5,3; 7,7 |
3,3·10-4 |
|
IV |
29 000 |
10,1 |
11,0 |
8,5 |
2,0·10-4 |
Статьи и публикации:
Как изменяются кинетическая, полная и потенциальная
энергии планеты при ее движении вокруг Солнца? В какое время линейная скорость
движения Земли по орбите и почему?
Кинетическая энергия Солнца, представленного в виде вращающейся сферы с массой, сосредоточенной в основном в оболочке.
Кинетическая энергия движения всех планет Солнечной системы без учета кинетических энергий вращения планет вокруг собс ...
О картинах мира
Последний, четвертый раздел нашего интегративного курса посвятим изучению современной научной картины мира, знание которой очень важно для выработки научного миропонимания.
Человеку всегда было свойственно описывать окружающий мир, изуча ...
Критические стадии и этапы развития осетровых рыб
У весенне-нерестующих рыб непосредственно сразу после оплодотворения следует период высокой чувствительности, со стадии 16-32 бластомеров чувствительность несколько падает и вновь повышается перед началом гаструляции. Гаструляция проходит ...