Условия проведения гидролиза 2Н-меченого БР определялись необходимостью предотвращения реакций изотопного (1Н-2Н) обмена водорода на дейтерий в молекуле фенилаланина и сохранения остатков триптофана в белке. Рассматривались два альтернативных варианта - кислотный и щелочной гидролиз. Кислотный гидролиз белка в стандартных условиях (6 н. HСl или 8 н. H2SO4, 1100С, 24 ч), как известно, приводит к полному разрушению триптофана и частичному разрушению серина, треонина и некоторых других аминокислот в белке [10], которые для настоящего исследования не играют существенной роли. Модификация этого метода, заключающаяся в добавлении в реакционную среду фенола [11], тиогликолевой кислоты [12], b-меркаптоэтанола [13], позволяет сохранить до 80-85% триптофана. Использование п-толуолсульфокислоты с 0.2% 3-(2-аминоэтил)-индолом или 3 М меркаптоэтансульфокислоты [14] также эффективно для сохранения триптофана (до 93%) [15]. Однако для решения поставленной задачи вышеперечисленные методы непригодны, поскольку обладают существенным недостатком: в условиях кислотного гидролиза с высокой скоростью происходит изотопный обмен ароматических протонов (дейтеронов) в молекулах триптофана, тирозина и гистидина [16], а также протонов при атоме С3 аспарагиновой и С4 глутаминовой кислот [17]. Поэтому даже проведение гидролиза в дейтерированных реагентах (6 н. 2HCl, 4 н. 2H2SO4 в 2H2O) не позволяет получать реальные данные о включении дейтерия в белок. http://sportcity74.ru/ товары с aliexpress для рыбалки.
В условиях щелочного гидролиза (4 н. Ba(OH)2 или 4 н. NaOH, 1100C, 24 ч) реакций изотопного обмена водорода практически не наблюдается (исключением является протон (дейтерон) у атома С2 гистидина, а триптофан не разрушается, что определило выбор метода гидролиза в настоящей работе. Упрощение процедуры выделения смеси свободных аминокислот за счет нейтрализации серной кислотой явилось причиной выбора в качестве гидролизующего агента 4 н. Ba(OH)2. Возможная D,L-рацемизация аминокислот при щелочном гидролизе не влияла на результат последующего масс-спектрометрического исследования уровня дейтерированности молекул аминокислот.
Таблица.
Величины пиков (М)+ в масс-спектре электронного удара метиловых эфиров N- Dns-[2, 3, 4, 5, 6-2H5]фенилаланина, N-Dns-[3, 5-2H2]тирозина и N-Dns-[2, 4, 5, 6, 7-2H5]триптофана.
|
Соединение |
Величина пика (М)+ |
Интенсив-ность, % |
Количество атомов дейтерия |
Уровень дейтерированности, % от общего количества атомов водорода |
|
N- Dns-[2, 3, 4, 5, 6-2H5]Phe-Ome |
413 414 415 416 417 418 |
7 18 15 11 14 6 |
1 2 3 4 5 6 |
13 25 38 50 63 75 |
|
N-Dns-[3, 5-2H2]Tyr-OMe |
428 429 430 |
12 15 5 |
- 1 2 |
- 14 29 |
|
N-Dns-[2, 4, 5, 6, 7-2H5]Trp-OMe |
453 454 455 456 457 |
5 6 9 11 5 |
2 3 4 5 6 |
26 38 50 64 77 |
Статьи и публикации:
Палеоантропы
Потомки архантропов называются палеоантропами по стадиальной терминологии или «архаичными сапиенсами» по принятой в современной антропологической литературе. В промежутке времени от 500 до 200 тыс. лет существовали промежуточные формы гом ...
Сигналы нервных клеток
Для анализа событий во внешнем мире или внутри нашего тела, для передачи информации от клетки к клетке нейроны используют электрические и химические сигналы. Расстояние передачи сигнала может быть большим: от кончиков пальцев на ногах до ...
Понятие о внутренней среде организма
К. Бернар (1865 г.) ввел понятие о внутренней среде организма.
Внутренняя среда - комплекс жидкостей, омывающих органы и ткани: кровь, лимфа, межтканевая и цереброспинальная жидкости. Плазма крови - универсальная внутренняя среда организ ...